· পলিঅ্যাক্রিলামাইডজেলটি অ্যাক্রিলামাইড মনোমার, পলিমারাইজেশন শুরুর উপাদান, অনুঘটক এবং লবণ এবং বাফার মিশ্রণের ডানদিকে একসাথে ব্যবহার করতে হবে।
· অ্যাক্রিলামাইডএবং BIS (N, N '- মিথিলিন ডাবল অ্যাক্রিলামাইড) হল মনোমার ফর্ম জেল ম্যাট্রিক্স।
· অ্যামোনিয়াম পারসালফেট আঠালো পলিমারাইজেশন প্রক্রিয়া শুরু করে। আঠা তৈরির জন্য পানিতে প্রস্তুত ১০% অ্যামোনিয়াম পারসালফেট দ্রবণ প্রয়োজন। বেশিরভাগ তথ্য সক্রিয় ব্যবহারের প্রয়োজনীয়তা নির্দেশ করে। তবে, ১০% দ্রবণটি কার্যক্ষমতার উল্লেখযোগ্য ক্ষতি ছাড়াই বেশ কয়েক সপ্তাহ ধরে ৪℃ তাপমাত্রায় রাখা যেতে পারে। ১০ মিলি পর্যন্ত তৈরি করুন এবং আঠা একত্রিত না হলে ফেলে দিন।
টিপ: শতাংশঅ্যাক্রিলামাইডসিকোয়েন্সিংয়ের ক্ষেত্রে আঠা এবং প্রোটিন আঠা এক নয়। যদি আগে থেকে তৈরি অ্যাক্রিলামাইড: BIS দ্রবণ ব্যবহার করেন, তাহলে সঠিক বোতলটি কিনতে ভুলবেন না।
· TEMED (N, N, N ', N ' - টেট্রামিথাইল ইথিলিনেডিয়ামিন) হল একটি অনুঘটক, একটি বাদামী বোতলে, রেফ্রিজারেটরে রাখা। আঠা ঢালার ঠিক আগে যোগ করুন।
· ইলেক্ট্রোফোরেসিসে ব্যবহৃত পলিঅ্যাক্রিলামাইড ইলেক্ট্রোফোরেসিস গ্লাস প্রতিবার আগে এবং পরে ধুয়ে ফেলতে হবে। ইলেক্ট্রোফোরেসিসের পরে, গরম সাবান জলে নরম ব্রাশ এবং কাপড় দিয়ে ধুয়ে ফেলুন, পাতিত জল দিয়ে ধুয়ে ফেলুন এবং শুকানোর জন্য রাখুন।
· আর্দ্রতা এবং ধুলো ফাঁপা পলিমারের কারণে হতে পারে। ইলেক্ট্রোফোরেসিসের আগে, কাচের প্লেটটি কাচের ক্লিনার দিয়ে পরিষ্কার করুন এবং নরম ব্রাশ দিয়ে মুছুন। পাতিত জল দিয়ে ধুয়ে ফেলুন এবং কাগজের ওয়াইপ দিয়ে ভালোভাবে শুকিয়ে নিন। কাগজ দিয়ে মুছতে যাওয়ার আগে ৭০% ইথানল দিয়ে ধুয়ে ফেললে পরিষ্কার করতে এবং শুকানোর গতি বাড়াতে সাহায্য করে। ধারাবাহিকভাবে অ্যাক্রিলামাইডের নমুনা যোগ করুন: BIS, জল, বাফার দ্রবণ, অ্যামোনিয়াম পারসালফেট, TEMED। ভালো করে ঝাঁকান এবং অবিলম্বে ঢেলে দিন।
পলিমারাইজেশনের আগে পলিঅ্যাক্রিলামাইড ডিগ্যাস করার প্রয়োজন নেই। (অক্সিজেন পলিমারাইজেশনকে বাধা দেয় বলে বুদবুদ অপসারণের জন্য অ্যাক্রিলামাইড ভ্যাকুয়ামে রাখা হত।)
অনুভূমিক আঠালো বিন্দুর নমুনা টিপস।
· নীচের বাক্সে কালো কাগজের টুকরো রাখুন, কালো পটভূমিতে কিছু নমুনা গর্ত তৈরি করুন যাতে আরও স্পষ্টভাবে দেখা যায়।
· কলয়েডের ঠিক উপরে আঠালো ট্যাঙ্ক ভর্তি বাফার।
· যদি প্রান্তে আলো থাকে, তাহলে আলো জ্বালাও, কলয়েড আলো জ্বলতে দাও। নমুনাটি পাইপেটে আঁকুন।
· স্বয়ংক্রিয় পাইপেটিং ডিভাইস ব্যবহার করে।
· ১০-২০০ মিউ ১ তরল মুভিং পয়েন্ট নমুনার বেশিরভাগ বিন্দুতে ব্যবহার করা যেতে পারে। খুব ছোট নমুনা গর্তের জন্য (১০μ১ এর কম), আঠা সিকোয়েন্সিংয়ের জন্য ব্যবহৃত লম্বা পাইপেট হেডটি আরও সুবিধাজনক।
· নমুনায় ডুবিয়ে রাখা পাইপেটিং, ধীরে ধীরে চলমান তরল শ্বাস নেওয়া। নমুনাটি গ্লিসারিনের সাথে আঠালো দেখাতে পারে এবং দ্রুত পাম্পিং করলে পাইপেটের মাথায় বাতাসের বুদবুদ ঢুকে যেতে পারে।
· নমুনাগুলি পাইপেটিং হেড শ্বাস নেওয়ার পর, তরল মাথাটি পাইপের প্রান্তে আলতো করে নাড়াবে অথবা কাগজ মোছার মাধ্যমে তরল মাথাটি ফোঁটার বাইরে রাখবে। নমুনাটি যাতে না চুষে নেওয়া হয় সেদিকে খেয়াল রাখবেন।
নমুনাটি নমুনা গর্তে রাখুন।
· পাইপেটিং ডিভাইস যাতে সামান্য চাপ থাকে, নমুনাগুলিকে ওভারফ্লো তরল মাথা সামান্য সরাতে সাহায্য করে।
· স্পট হোল থেকে সামান্য উঁচুতে বাফারে ঢোকানো পাইপেটিং হেডটি ধনাত্মক চাপ বজায় রাখে। পাইপেটের ডগাটি একটি ছোট গর্তে ঢোকানো যেতে পারে।
· ধীরে ধীরে এবং স্থিরভাবে নমুনাগুলি বের করে আনুন। পাইপেটের ডগাটি বিন্দু নমুনা গর্তের উপরে স্থাপন করা হবে, এবং নমুনাটি গর্তে ডুবে যাবে। নমুনা গর্তটি ভিতরে ঠেলে দেওয়ার পরিবর্তে পূরণ করার জন্য নমুনাটিকে ডুবতে দিন।
· তরল মাথা সহ নমুনার শেষ ফোঁটা একবার, তরল দ্বিতীয় লেগে চলে যাবে, ধীরে ধীরে তরল সরানো বাড়াবে, বাফার থেকে বেরিয়ে যাবে
উল্লম্ব আঠালো নমুনা কিভাবে করবেন?
· দুটি কাচের টুকরোর মধ্যে উল্লম্ব আঠালো বিন্দুর নমুনা গর্ত তৈরি করা হয়। খুব পাতলা আঠাতে, পিপেটের মাথাটি দুটি কাচের প্লেটের মধ্যেও ঢোকানো যায় না। গ্লিসারিনের দিকে নজর রাখুন! নমুনা গর্তের উপরে পিপেটের মাথাটি রাখুন এবং নমুনাটি গর্তে ডুবে যাবে।
· নমুনার আগে, পলিপ্রোপিলিন অ্যাসিল জেল নমুনা গর্তের উল্লম্ব বিন্দুটি পরিষ্কার করে ধুয়ে ফেলতে ভুলবেন না। আনপলিমারাইজড অ্যাক্রিলামাইড এবং নমুনা গর্তের নীচে উপস্থিত জল ধুয়ে ফেলুন। জল নমুনা গর্তটিকে উল্লেখযোগ্যভাবে ছোট করতে পারে। একটি 25 মিলি বা 50 মিলি সিরিঞ্জ এবং একটি 18-গেজ সুই ব্যবহার করুন। ইলেক্ট্রোফোরেসিস বাফার ঢেলে দিন এবং সাবধানে নমুনা গর্তটি ধুয়ে ফেলুন।
· নমুনার গর্ত দেখা কঠিন হতে পারে, কিন্তু একই সাথে, বাকিটা সহজ। যদি অতিরিক্ত গর্ত থাকে, তাহলে ব্রোমোফেনল নীল দিয়ে নমুনা বাফার পরীক্ষা করা যেতে পারে।
পোস্টের সময়: মার্চ-৩১-২০২৩