পলিঅ্যাক্রিলামাইড জেল ইলেক্ট্রোফোরসিসের জন্য সতর্কতা

· polyacrylamideজেল অ্যাক্রিলামাইড মনোমার, পলিমারাইজেশন স্টার্টিং উপাদান, অনুঘটক, এবং লবণ এবং বাফার মিশ্রণের অধিকার একসাথে করতে হবে।

· অ্যাক্রিলামাইডএবং BIS (N, N' - মিথিলিন ডাবল অ্যাক্রিলামাইড) হল মনোমার ফর্ম জেল ম্যাট্রিক্স।

· অ্যামোনিয়াম পারসালফেট আঠালো পলিমারাইজেশন প্রক্রিয়া শুরু করে।আঠা তৈরির জন্য পানিতে প্রস্তুত 10% অ্যামোনিয়াম পারসালফেট দ্রবণ প্রয়োজন।বেশিরভাগ তথ্য সক্রিয় ব্যবহারের প্রয়োজন নির্দেশ করে।যাইহোক, 10% দ্রবণটি 4 ℃ এ বেশ কয়েক সপ্তাহের জন্য ক্রিয়াকলাপের উল্লেখযোগ্য ক্ষতি ছাড়াই স্থাপন করা যেতে পারে।10 মিলি পর্যন্ত তৈরি করুন এবং আঠালো একত্রিত করতে ব্যর্থ হলে ফেলে দিন।

টিপ: এর শতাংশঅ্যাক্রিলামাইডসিকোয়েন্সিং আঠালো এবং প্রোটিন আঠালো একই নয়।যদি প্রিমেড অ্যাক্রিলামাইড ব্যবহার করেন: BIS সলিউশন, সঠিক বোতল পেতে ভুলবেন না।

· TEMED (N, N, N ', N' - tetramethyl ethylenediamine) একটি অনুঘটক, একটি বাদামী বোতলে, রেফ্রিজারেটরে রাখা হয়।আঠালো ঢালা ঠিক আগে যোগ করুন।

· পলিঅ্যাক্রিলামাইড ইলেক্ট্রোফোরেসিস ইলেক্ট্রোফোরসিসে ব্যবহৃত গ্লাস প্রতিবার আগে এবং পরে ধুয়ে ফেলতে হবে।ইলেক্ট্রোফোরেসিস করার পরে, গরম সাবান জলে একটি নরম ব্রাশ এবং কাপড় দিয়ে ধুয়ে ফেলুন, পাতিত জল দিয়ে ধুয়ে ফেলুন এবং শুকানোর জন্য দাঁড়ান।

· ফাঁপা পলিমার দিয়ে আর্দ্রতা এবং ধুলো হতে পারে।ইলেক্ট্রোফোরসিসের আগে, গ্লাস ক্লিনার দিয়ে গ্লাস প্লেট পরিষ্কার করুন এবং একটি নরম ব্রাশ দিয়ে মুছুন।পাতিত জল দিয়ে ধুয়ে ফেলুন এবং একটি কাগজ মুছা দিয়ে পুঙ্খানুপুঙ্খভাবে শুকিয়ে নিন।কাগজ দিয়ে মোছার আগে 70% ইথানল দিয়ে ধুয়ে পরিষ্কার করা এবং শুকানোর গতি বাড়াতে সাহায্য করে।ক্রমাগত অ্যাক্রিলামাইডের নমুনা যোগ করুন: BIS, জল, বাফার দ্রবণ, অ্যামোনিয়াম পারসালফেট, TEMED।ভালোভাবে নেড়ে সাথে সাথে ঢেলে দিন।

পলিমারাইজেশনের আগে পলিঅ্যাক্রিলামাইড ডিগ্যাস করার প্রয়োজন নেই।(বুদবুদ অপসারণের জন্য অ্যাক্রিলামাইড একটি ভ্যাকুয়ামে স্থাপন করা হত কারণ অক্সিজেন পলিমারাইজেশনকে বাধা দেয়।)

অনুভূমিক আঠালো পয়েন্ট নমুনা টিপস.

নীচের বাক্সে কালো কাগজের একটি টুকরো রাখুন, কালো পটভূমিতে আরও স্পষ্টভাবে দেখতে কিছু নমুনা গর্ত করুন।
· আঠালো ট্যাঙ্ক ভর্তি বাফার, ঠিক কলয়েডের উপরে।
যদি প্রান্তে আলো থাকে তবে লাইট অন করুন, আলো জ্বলতে দিন।পাইপেটে নমুনা আঁকুন।
স্বয়ংক্রিয় পাইপটিং ডিভাইস ব্যবহার করে।
· 10-200 মিউ 1 তরল মুভিং পয়েন্ট নমুনার বেশিরভাগ পয়েন্টে ব্যবহার করা যেতে পারে।খুব ছোট নমুনা গর্তের জন্য (10μ1 এর কম), সিকোয়েন্সিং আঠার জন্য ব্যবহৃত লম্বা পিপেট মাথাটি আরও সুবিধাজনক।

· নমুনায় নিমজ্জিত পাইপেটিং, ধীরে ধীরে চলমান তরল শ্বাস নেওয়া।নমুনাটি গ্লিসারিন দিয়ে আঠালো দেখাতে পারে এবং দ্রুত পাম্প করার ফলে পাইপেটের মাথায় বাতাসের বুদবুদ আসতে পারে।

পিপটিং হেড ইনহেল করার পরে নমুনাগুলি পাইপের প্রান্তে তরল মাথাটি আলতো করে সরানো হবে বা মুছা কাগজের ফোঁটাগুলির বাইরে তরল মাথা চুষবে।সাবধানে নমুনা চুষে না.

নমুনা গর্তে নমুনা রাখুন

· পিপিং ডিভাইস সামান্য চাপ রাখা, নমুনা সামান্য সরানো ওভারফ্লো তরল মাথা.
· বাফারের মধ্যে ঢোকানো পাইপটিং হেড, স্পট হোলের চেয়ে সামান্য উঁচু, ইতিবাচক চাপ বজায় রাখে।পাইপেটের ডগা একটি ছোট গর্তে ঢোকানো যেতে পারে।
ধীরে ধীরে এবং স্থিরভাবে নমুনা আউট.পাইপেটের টিপটি পয়েন্ট নমুনা গর্তের উপরে স্থাপন করা হয় এবং নমুনাটি গর্তে ডুবে যাবে।ভিতরে ঠেলে দেওয়ার পরিবর্তে নমুনা গর্তটি পূরণ করতে নমুনাটিকে ডুবতে দিন।
তরল মাথা সহ নমুনার শেষ ফোঁটা একবার, তরল দ্বিতীয় পায়ে চলে যাবে, ধীরে ধীরে তরল সরানো বাড়াবে, বাফারের বাইরে চলে যাবে

উল্লম্ব আঠালো স্যাম্পলিং কিভাবে করবেন?

· উল্লম্ব আঠালো পয়েন্ট নমুনা গর্ত কাচের দুটি টুকরা মধ্যে গঠিত.খুব পাতলা আঠালোতে, পিপেটের মাথাটি এমনকি দুটি কাচের প্লেটের মধ্যে ঢোকানো যাবে না।গ্লিসারিন দেখুন!নমুনার গর্তের উপরে পাইপেটের মাথা রাখুন এবং নমুনাটি গর্তে ডুবে যাবে।
· পয়েন্ট নমুনা আগে, polypropylene অ্যাসিল জেল নমুনা গর্ত পরিষ্কার rinsed উল্লম্ব বিন্দু করা নিশ্চিত করুন.নমুনা গর্তের নীচে প্রদর্শিত হতে পারে এমন অপলিমারাইজড অ্যাক্রিলামাইড এবং জল ধুয়ে ফেলুন।জল নমুনা গর্ত উল্লেখযোগ্যভাবে ছোট করতে পারেন.একটি 25 মিলি বা 50 মিলি সিরিঞ্জ এবং একটি 18-গেজ সুই ব্যবহার করুন।ইলেক্ট্রোফোরেসিস বাফারে ঢেলে সাবধানে নমুনা গর্তটি ফ্লাশ করুন।
· নমুনা গর্ত দেখা কঠিন হতে পারে, কিন্তু একই সাথে, বাকিটাও সহজ।যদি অতিরিক্ত ছিদ্র থাকে তবে নমুনা বাফারটি ব্রোমোফেনল নীল দিয়ে পরীক্ষা করা যেতে পারে।